技術資料 - 活性 - 星號活性(特異性降低或改變)

星號活性(特異性降低或改變)                 收藏

在非理想的條件下,內切酶切割與識別位點相似但不完全相同的序列,這一現象稱星號活性。有人提出,這種
“星號”活性可能是內切酶的一種普遍特性(1),如果提供給相應反應條件,所有內切酶都會出現非特異性切
割。雖然星號活性產生的傾向性不同,但是當使用隨酶提供的NEBuffer 時,內切酶不會產生星號活性。如果已
經報道該酶存在星號活性,那么在產品目錄、說明書和網站上會做說明。

 

酶識別特異性的改變受酶本身的性質及可能引起星號活性的反應條件影響。常見的引起酶識別改變的條件有:單
堿基替換、識別序列外側堿基縮短以及單鏈切刻(2)。有些酶顯示在標準反應條件下序列特異性降低,并且有
同源位點時,能夠切開非同源(次級)位點(3)。

 

注:上述反應條件的改變對于每種酶的影響不同。

 

NEB 建議使用 50 μl 反應體系進行酶切。但在必須使用小體積酶切時,需要注意以上列舉的各種情況以避免星號活性。
此外,可使用 NEB 的系列產品高保真內切酶(HF)可以使操作更簡便。更多
高保真內切酶信息請查詢 NEB 的網站。

 

參考文獻:

(1) Nasri, M. and Thomas, D. (1986) Nucleic Acids Res. 14, 811.

(2) Barany, F. (1988) Gene, 68, 149.

(3) Bitinaite, J. and Schildkraut, I. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99, 1164–1169.

(4) Nasri, M. and Thomas, D. (1987) Nucleic Acids Res. 15, 7677.

(5) Tikchonenko, T.I., et al. (1978) Gene, 4, 195–212. 

 

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