技術資料 - 活性 - 限制性內切酶活性表

限制性內切酶在不同緩沖液中的活性                 收藏

NEB 目前提供超過 200 種 CutSmart 內切酶,這些內切酶在 CutSmart 緩沖液中活性為 100%。這大大提高
了內切酶的效率、靈活性和簡便性,尤其是進行雙酶切時。
 
該表總結了 NEB 所有限制性內切酶的活性信息。為了幫助您選擇雙酶切的最佳條件,該表列出了酶的最佳活性
NEBuffer(隨酶提供)和每種內切酶在四個標準緩沖液中的活性。需要注意的是 BSA 現在已經添加到緩沖液
中,不再單獨提供。雙酶切反應體系請參考 20132014 商品目錄第 276 頁。此外,活性表中列出了反應溫
度、熱失活溫度、推薦稀釋液、甲基化敏感性和該酶是否有省時酶特性(即在建議的反應條件下,5-15 分鐘可
完全切割底物,過夜酶切也不會降解 DNA)。
 
注:表中數值為近似值,所用底物與內切酶定義中的底物相同,更新的內容請查閱 www.wtgauges.com.cn 及
        www.neb.com
 

圖標注釋

               表示該酶使用的是特殊緩沖液,不同于四種標準緩沖液。表中標明了該緩沖液與其它標準緩沖液的兼
                  容性

      單獨提供 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。為使相應的酶達到 100% 的活性,需將 SAM 加入到 1X 緩沖
                 
                  液中至說明書標明的終濃度

        重組酶

        省時內酶切(Time-Saver)(參考 20132014 商品目錄第 287-288 頁)

        經過基因工程改造其活性更佳(參考 20132014 商品目錄第 286 頁)

        dam 甲基化敏感(參考 20132014 商品目錄第 315-317 頁)

        dcm甲基化敏感(參考 20132014 商品目錄第 315-317 頁)
        CpG 甲基化敏感(僅針對真核生物基因組 DNA,參考 20132014 商品目錄第 315-317 頁)

        該酶提供預混液形式。

 

緩沖液成分 (1X):

  10 mM Bis Tris Propane-HCl,10 mM MgCl2100 µg/ml BSA (pH 7.0 @ 25°C)。

  50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2100 µg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)。

  100 mM NaCl,50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2100 µg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)。

  50 mM Potassium acetate,20 mM Tris-acetate,10 mM Magnesium acetate,
                                             100 µg/ml BSA 
(pH 7.9 @ 25°C)。

使用前請將緩沖液完全融解并充分混勻。

 

反應溫度:

表中列出了限制性內切酶的最適反應溫度。對于最適反應溫度不是 37℃ 的限制性內切酶,請閱 20132014 商品目錄 284 頁查詢其在 37℃ 時的活性。

 

熱失活:

熱失活是終止酶切反應的一種簡便易行的方法。大多數最適反應溫度為 37℃ 的酶,在 65℃ 條件下溫育 20 分
鐘即可失活。一些在 65℃ 下不能失活的酶如將溫度升高至 80℃,溫育 20 分鐘也可失活。下表注明了該酶能
否進行熱失活以及熱失活的相應溫度。

 

稀釋緩沖液:

稀釋限制性內切酶時,建議使用稀釋緩沖液(A、B 或C)。建議用前稀釋且稀釋終濃度不要低于 1,000 units/ml。
目錄及說明書中標注了每一種內切酶相應的稀釋緩沖液。

 

稀釋緩沖液成份:

稀釋液 A:

50 mM KCl,10 mM Tris-HCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,200 μg/ml BSA 和 50% 甘油 (pH 7.4 @ 25℃) 。

稀釋液 B:

300 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,500 μg/ml BSA 和 50% 甘油 (pH 7.4 @ 25℃) 。

稀釋液 C:

250 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.15% Triton X-100,200 μg/ml BSA 和 50% 甘油
(pH 7.4 @ 25℃) 。

 

活性注意事項:

1. 延時酶切、高酶濃度或者甘油濃度超過 5% 會導致星號活性。

2. 延長酶切時間會導致星號活性。

3. 甘油濃度超過 5% 會導致星號活性。

*在該緩沖液中可能會出現星號活性。

 

限制性內切酶活性表

 

 

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