產品資料 - DNA聚合酶與擴增技術 - 等溫擴增和鏈置換

WarmStart? 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)                              收藏

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#M1708L
500 rxns
12,679.00元
#M1708S
100 rxns
3,169.00元

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產品特點

 設計 LAMP 引物,請使用 NEB LAMP Primer Design Tool

·為環介導等溫擴增(LAMP)提供便捷的一步法解決方案,可用于 DNA 或 RNA(RT-LAMP)樣品
·預混液含熱敏 UDG 和 dUTP,降低殘留污染風險
·預混液具備完全緩沖力,可兼容不同樣品類型,適用于多種檢測方法
·溫啟動技術可在室溫下抑制酶活性
·如需了解使用 RT-LAMP 進行 COVID-19 快速篩查,請點擊 Learn more
 

產品描述

 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)為 LAMP/RT-LAMP 提供了便捷的一步法解決方案,適用于 DNA 或 RNA 樣品。LAMP 和 RT-LAMP 是一種常用等溫擴增技術,通過使用 LAMP 特異性引物(用戶自備)和鏈置換 DNA 聚合酶進行靶標核酸的快速檢測。該預混液是在優化后 LAMP 緩沖液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反轉錄酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反轉錄酶均經過基因工程改造,提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反應中的性能。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)具備完全緩沖力,可兼容不同樣品類型,適用于多種檢測方法,包括:濁度檢測、實時熒光檢測(使用 LAMP 熒光染料時)和終點可視化檢測,例如:基于金屬離子指示劑的變色檢測(羥基萘酚藍)

 
由于先前擴增的產物會無意中成為后續反應的底物造成污染,因此預混液中的 dUTP 和熱敏 UDG 可有效降低殘留污染風險。熱敏 UDG 在溫度>50℃時可完全失活,因此對反應沒有影響。
 
圖 1:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)適用于多種檢測方法
 
 
 
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)(NEB #M1708)對 RNA 或 DNA 樣品擴增,可通過多種實時(A)和終點(B)檢測方法進行結果判定。這些檢測方式包括熒光法、不基于 pH 的變色法(例如:羥基萘酚藍)、濁度法或瓊脂糖凝膠電泳。對于實時熒光檢測,可使用包含 50X LAMP 熒光染料的試劑盒(NEB #E1708),在常規實時 PCR 儀器的 SYBR®/FAM 通道中進行監測。
 
圖 2:LAMP/RT-LAMP 預混液和適用樣品類型
 
 
NEB 基于 pH 變化的 WarmStart 變色LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含/不含 UDG)(NEB #M1804)(NEB# M1800)緩沖力低,因此可使用 pH 敏感染料進行可視化擴增檢測。基于 pH 值改變而產生的顏色變化(如粉紅變黃色)所需緩沖力要低,高緩沖力樣品或酸性樣品可能會影響顏色變化,因此,這種方法限制了檢測樣品的種類。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含/不含 UDG)(NEB #M1708,NEB #E1708)(NEB #E1700)是完全緩沖的,可檢測所有樣品類型,適用于多種檢測方法,包括熒光或其它變色染料(例如:羥基萘酚藍)
 
圖 3:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)對人 DNA 和 RNA 靶標進行穩健檢測
 
 
 
 使用 WarmStart 熒光 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(不含 dUTP/UDG)(NEB #M1700 試劑盒中的組分)和 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)(NEB #M1708)進行 RT-LAMP(RNA 靶標)或 LAMP(DNA 靶標)實驗。反應加入 1X LAMP 引物和 1X LAMP 熒光染料后,分別加入三個數量級的 Jurkat RNA 或 Jurkat DNA (10 ng-0.1 ng)和無模板對照(NTC),每個樣品做 4 個重復,形成 25 µl 反應體系,置于 96 孔板中 65℃孵育 40 分鐘。使用實時熱循環儀(Bio-Rad® CFX96)中的 SYBR/FAM 通道進行 15 秒一次的熒光檢測。每個點代表熒光信號超過儀器閾值的時間。除了個別說明外,每個樣品都檢測到所有 4 個重復(注:如果各重復的檢測時間相似,則檢測點重疊)。總體而言,各樣品檢測結果顯示:NEB #M1700 和 NEB #M1708 性能一致。無模板對照均無擴增。
 
圖 4:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)對人 DNA 和 RNA 靶標進行穩健檢測
 
通過手動或 TEMPEST® 自動化液體處理工作站(96 孔,25 µl 反應)建立針對于合成 SARS-CoV-2 RNA 樣品的 LAMP 檢測體系。檢測樣品為:陽性樣品(人總 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷貝的合成 SARS-CoV-2 RNA)或無模板對照(NTCs)。經 65℃ 孵育 40 分鐘,使用 1X LAMP 熒光染料在實時熒光儀器(Bio-Rad CFX96)中的 SYBR/FAM 通道檢測。結果顯示:兩種體系的檢測時間和最低檢出限(LOD)結果一致。
 
圖 5:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)兼容不基于 pH 的變色法(例如:羥基萘酚藍)
 
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 預混液(含 UDG)和針對 N 和 E 基因的混合引物對合成 SARS-CoV-2 RNA 進行擴增,使用 0.12 mM 羥基萘酚藍作為變色金屬指示劑。檢測樣品為:陽性樣品(人總 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷貝的合成 SARS-CoV-2 RNA)、陰性樣本(人總 RNA)或無模板對照(NTCs),如圖所示。反應體系(25 µl)經 65℃孵育 45 分鐘后,進行肉眼檢測。

A.所有陽性樣品均顯示陽性結果,包括在所有僅含 50 拷貝的低起始量樣品(n = 20),顏色明顯從紫色變為藍色。

B.所有陰性樣品均未出現顏色變化(n = 32)。
 
 
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