LunaScript? 反轉錄預混液試劑盒(無引物)                              收藏

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#E3025L
100 rxn
3,929.00元
#E3025S
25 rxn
1,269.00元

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產品特點

·該 5X 預混液提供 Luna 反轉錄酶、dNTP 和小鼠 RNase 抑制劑。
·不含引物劑型可讓用戶更靈活的選擇引物,以達到 cDNA 合成最佳效果
·15 分鐘內即可完成第一鏈 cDNA 合成
·可用于第一鏈 cDNA 合成、兩步法 RT-qPCR、兩步法 RT-PCR以及 RNA-seq
·包含無干擾、可視化藍色示蹤染料,有助于減少加樣錯誤
·提供 No-RT 對照預混液,增加實驗可信度

產品說明

LunaScript® 反轉錄預混液試劑盒(無引物)包含經過優化后的 5X 預混液,以及除引物外第一鏈 cDNA 合成所需的所有組分。該預混液含有具備熱穩定特性的 Luna 反轉錄酶,可在更高溫下合成 cDNA。試劑盒還提供小鼠 RNase 抑制劑(保護模板 RNA 免受降解)和 dNTP。此外,組分中的藍色示蹤染料可為反轉錄和下游應用提供可視化示蹤。
 
該預混液與隨機引物、oligo dT 引物以及基因特異性引物兼容,讓 cDNA 合成更靈活。LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)合成的 cDNA 產物可用于多種下游應用。在實時定量 PCR 中,建議使用混有隨機引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。與 LunaScript SuperMix 反轉錄試劑盒(NEB #E3010)一樣,無論是 1 μg 總 RNA 還是低拷貝 RNA,該預混液均能提供穩健、線性和靈敏的檢測。如需合成長片段或全長 cDNA,則建議使用 oligo dT 引物。僅需 55℃ 孵育 10 分鐘,LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)即可合成長達 9 kb 的 cDNA 產物。試劑盒還提供 No-RT 對照預混液,可快速建立對照反應體系。
 
圖 1:三種 cDNA 合成試劑的區別:Supermix、預混液、cDNA 合成試劑盒
圖 2:LunaScript 第一鏈 cDNA 合成時間最短,僅需 13 分鐘
 
比較不同廠家的 cDNA 合成方案。LunaScript SuperMix 反轉錄試劑盒和 LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)所需反應時間最短,并可以耐受高溫,降低 RNA 復雜二級結構的影響。
 
圖 3:LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)支持多種下游應用
 
通過使用不同的引物(例如:隨機引物混合液、d(T))23VN 引物或隨機六聚體引物),LunaScript 反轉錄預混液試劑盒合成的 cDNA可適于不同下游應用(例如:RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq)。
 
 
圖 4:在兩步法 RT-qPCR 定量中,LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)功效穩健
 
A.根據各廠商產品說明書,使用幾種市售第一鏈 cDNA 合成試劑盒將 1 μg–100 pg 人總 RNA 反轉錄成 cDNA,引物為隨產品提供的隨機引物。通過 8 個靶基因(豐度、長度和 GC 含
量不同)的 qPCR 結果對 cDNA 產物進行評估。使用 Luna 通用探針法 qPCR 預混液(NEB# M3004)對 cDNA 產物進行 qPCR 檢測。結果評估了擴增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量檢測和缺乏無模板對照(NTC)擴增(ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。綠色框表示靶基因擴增表現(效率=90-110%,ΔCq≥3)。關于該可視化分析方法的詳細信息,請在NEB 官網搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B.根據上述 4 個靶基因(兩個經典內參基因和兩個其它基因)的 Cq 值和上樣量繪制曲線,結果顯示:與其它商品化試劑盒相比,LunaScript 的 Cq 值最低
 
圖 5:在兩步法 RT-qPCR 中,LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)性能更優異
A.根據各廠商產品說明書,使用幾種市售第一鏈 cDNA 合成試劑盒將 1 μg–100 pg 人總 RNA 反轉錄成 cDNA,引物為隨產品提供的隨機引物。通過 8 個靶基因(豐度、長度和 GC 含
量不同)的 qPCR 結果對 cDNA 產物進行評估。使用 Luna 通用探針法 qPCR 預混液(NEB# M3004)對 cDNA 產物進行 qPCR 檢測。結果評估了擴增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量檢測和缺乏無模板對照(NTC)擴增(ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。綠色框表示靶基因擴增表現(效率=90-110%,ΔCq≥3)。關于該可視化分析方法的詳細信息,請在NEB 官網搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B.根據上述 4 個靶基因(兩個經典內參基因和兩個其它基因)的 Cq 值和上樣量繪制曲線,結果顯示:與其它商品化試劑盒相比,LunaScript 的 Cq 值最低。
 
 
圖 6:在常規 PCR 或高保真 PCR 中,LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)能夠合成不同長度范圍 cDNA
 

 使用 LunaScript 反轉錄預混液試劑盒(無引物)將 1 μg Jurkat 總 RNA 反轉錄成 cDNA,引物為 d(T))23VN,使用標準反應條件 55℃ 孵育 10 分鐘,95℃ 孵育 1 分鐘。之后使用不同 PCR 擴增試劑對 cDNA 產物進行檢測。對于 5 kb以內的常規應用,建議使用 OneTaq 2X 預混液(NEB #M0482);對于高保真擴增,建議使用 Q5 熱啟動超保真 2X 預混液(NEB #M0494);對于長片段高產量擴增,建議使用 LongAmp Taq 2X 預混液(NEB #M0287)(數據未顯示)

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