產品資料 - 用于二代測序的 NEBNext? 試劑 - 適用于 Illumina 測序平臺/免疫測序

NEBNext? 免疫測序試劑盒(人)                              收藏

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#E6320L
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相關產品

 NEBNext® 免疫測序試劑盒(小鼠)

產品特點

 • 通過對受體序列的深入分析,揭示復雜的免疫系統

對 B 細胞受體(BCR)和 T 細胞受體(TCR)進行富集和測序
制備 B 細胞和 T 細胞的全長免疫基因組庫
使用唯一分子標簽序列(UMI)準確定量轉錄本
使用用于生物信息流程(教程)的開源軟件工具——pRESTO 分析數據
 

產品說明

 概述

免疫組庫測序常常用來分析當下的和過去的免疫應答反應。最常應用領域包括:自身免疫性疾病的表征、腫瘤學、傳染病中和抗體的發現、腫瘤浸潤淋巴細胞以及用作研究殘留病的工具。二代測序(NGS)平臺在讀長和通量方面的最新進展促進了免疫組庫測序的發展。

 
NEBNext® 免疫測序試劑盒(人)通過對 B 細胞和 T 細胞全長免疫組庫分析,能獲得體細胞的所有突變信息。該試劑盒提供引物模塊,可用于分析完整的 V、D、J 區域和 IgM、IgD、IgG、IgA、IgE 亞類,并分析 BCR 輕鏈、BCR 重鏈、TCRα 鏈和 TCRβ 鏈。該試劑盒還提供唯一分子標簽序列(UMI),將來源于同一個分子的 PCR 產物組成共有序列,以便提高測序準確性,消除 PCR 偏差。Galaxy 平臺提供一個開源軟件工具——pRESTO,用于在本地或云端開展超強生物信息分析。為了確保不熟悉 Galaxy 平臺的用戶能成功使用分析軟件,pRESTO 提供教學教程。
 
抗體和 TCR 結構的簡化示意圖:
 
 
免疫組建庫流程:
 
產品描述
使用唯一分子標簽序列(UMI)實現克隆型的精準檢測。比較克隆型頻率:使用 10 ng 和 100 ng T 細胞總 RNA 制備人類 TCR 文庫,在有或沒有 UMI 情況下分別建庫。根據有 UMI 的測序結果,對前 100 個高表達克隆型進行排序。重復建庫,克隆型頻率重疊繪制于圖中。每個條形或圓點代表一個克隆,該克隆經過總讀長分析或使用 UMI 過濾。使用 UMI 可對原始樣本中的起始 RNA 分子進行絕對定量。當將克隆按照富集度從高到底進行排序,沒有 UMI 的數據會導致 PCR 或測序擴增的偏差,從而誤導樣本中克隆型頻率的分析。UMI 的使用通過對起始樣本中 RNA 的絕對定量來校正偏差。使用 UMI 也可以在重復本之間實現更好的相關性,尤其是起始量較低時。各個文庫向下抽樣 500,000 reads。
 
使用 NEBNext 免疫測序試劑盒(人),能夠在同一管中制備人 BCR 和 TCR 文庫。分別使用 1 μg、100 ng 和 10 ng 人 PBMC 總 RNA(Takara Bio #636592)制備人 BCR+TCR 文庫,每個起始量都做有平行實驗。所有文庫向下抽樣 950,000 reads。使用 pRESTO 工具完成 reads 過濾、序列組裝和基于 UMIs 組成共有序列。使用 MiGMAP 鑒別 V、D 和 J 區域。圖(A)表示每個人類 PBMC 總 RNA 起始樣本檢測到的克隆型數量。圖(B)表示各文庫中 B 細胞鏈和 T 細胞鏈所占百分比。
 

 
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